miR-30c-5p对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制 - 赵斌; 杨金叶; 李支尧; 毕城伟; 杨李波; 施致裕; 李心; 张建朋; 施远龙; 杨勇; 张国颖 (吉林大学学报（医学版）, 2024)
R737.25; 目的:探讨微小RNA(miR)-30c-5p对人前列腺癌细胞(LNCap)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制.方法:LNCap细胞根据转染质粒不同分为LNCap组(无转染质粒)、miR-30c-5p mimic组(转染miR-30c-5p mimic)、mimic NC组(转染miR-30c-5p mimic NC)、sh-DNA损伤诱导转录因子 4(DDIT4)组(转染sh-DDIT4)、sh-NC组(转染sh-DDIT4 NC)、miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-NC组(共转染miR-30c-5p mimic和pc DNA3.1-DDIT4空载质粒)和miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4 组(共转 染 miR-30c-5p mimic 和 pc-DNA3.1-DDIT4 过 表 达 质 粒),RWPE-1细胞正常培养.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中miR-30c-5p和DDIT4 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中DDIT4 蛋白表达水平,CCK-8 法检测各组LNCap细胞增殖率,Transwell小室实验检测各组LNCap细胞侵袭细胞数,划痕实验检测各组LNCap细胞划痕愈合率,双荧光素酶报告基因实验验证miR-30c-5p与DDIT4的靶向关系.体内裸鼠成瘤实验,18只雄性BALB/c裸鼠随机分为空白组、agomiR-NC组(转染agomiR-30c-5p NC)和agomiR-30c-5p组(转染agomiR-30c-5p),每组 6只.agomiR-NC组和agomiR-30c-5p组裸鼠皮下注射LNCap细胞,空白组裸鼠注射等量生理盐水,检测各组小鼠肿瘤体积.HE染色观察各组小鼠前列腺癌组织形态表现,RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测各组小鼠前列腺癌组织中miR-30c-5p和DDIT4 mRNA表达水平及DDIT4蛋白荧光强度.结果:体外前列腺癌细胞实验,与人正常前列腺上皮RWPE-1细胞比较,前列腺癌LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显降低(P<0.01),DDIT4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);转染48 h后,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞中miR-30c-5p