脂肪干细胞源性外泌体对体外巨噬细胞迁移能力的影响 - 袁博; 谢佳忆; 江思瑜; 孟亚军; 朱清华; 李晓飞; 付秀美; 谢利德 (吉林大学学报（医学版）, 2024)
Q25; 目的:探讨脂肪干细胞源性外泌体(ADSC-Exos)对巨噬细胞 RAW264.7 迁移能力的影响,阐明其促进巨噬细胞功能的作用.方法:分离SD大鼠附睾旁脂肪组织,进行脂肪源性干细胞(ADSCs)原代培养,通过成脂和成骨分化诱导,结合油红O和茜素红染色检测ADSCs的多向分化潜能.采用Western blotting法和免疫荧光法检测ADSCs标记物CD29及CD44阳性表达情况,采用外泌体(Exos)分离试剂盒提取ADSC-Exos,透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析仪检测ADSC-Exos的形态大小和粒径分布范围,Western blotting法检测Exos特异性标记物CD9和TSG101蛋白表达情况,示踪法观察巨噬细胞摄取ADSC-Exos情况.将巨噬细胞RAW264.7分为对照组、10 mg·L-1 ADSC-Exos组、20 mg·L-1 ADSC-Exos组和40 mg·L-1 ADSC-Exos组.5-乙基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色检测各组巨噬细胞活性,Transwell小室实验检测各组巨噬细胞迁移细胞数,荧光显微镜观察各组巨噬细胞黏附情况.结果:原代ADSCs培养24 h后细胞贴壁生长,呈散在、长梭形;培养7 d,贴壁细胞呈齿梳状、旋涡状有序排列,呈成纤维细胞样外观;培养10代后ADSCs形态不规则,增殖速度减慢.分离提取的ADSCs具有成骨和成脂分化潜能,CD29 和CD44 蛋白表达阳性.透射电子显微镜下ADSC-Exos呈茶碟状,ADSC-Exos的粒径主峰分布于 132 nm附近,ADSC-Exos中CD9和TSG101蛋白表达阳性,即ADSC-Exos提取成功.荧光显微镜下RAW264.7细胞核周围可检测到红色荧光信号,即ADSC-Exos可以被巨噬细胞摄取.与对照组比较,10、20和40 mg·L-1 ADSC-Exos组EdU阳性细胞率均明显升高(P<0.05);与10 mg·L-1 ADSC-Exos组比较,20 mg·L-1 ADSC-Exos组EdU阳性细胞率均明显升高(P<0.05).与对照组比较,10、20和40 mg·L-1 ADSC-Exos组巨噬细胞迁移细胞数均明显增加(P<0.05);与10 mg·L-1 ADSC-Exos组比较,20和40 mg·L-1 ADSC-Exos组巨噬细胞迁移细胞数均明显增加(P<0.05).与对照组比较,10、20和40