血管软化丸调控Nrf2/xCT/GPX4通路抑制血管内皮细胞铁死亡改善动脉粥样硬化的作用机制 - 孙孟艳; 秦合伟; 李彦杰; 王梦楠; 刘丹丹; 高洋 (北京中医药大学学报, 2024)
R285.5; 目的 从核因子E2相关因子2(Nrf2)/胱氨酸谷氨酸反向转运蛋白(xCT)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路探讨血管软化丸对ApoE-/-动脉粥样硬化(AS)小鼠铁死亡的作用及分子机制.方法 10只普通饲料喂养C57BL/6J雄性小鼠为正常组.ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养12周构建AS动物模型,按随机数字表法将50只造模成功的小鼠分为模型组、血管软化丸低剂量(2.34 g/kg)组、血管软化丸高剂量(4.68 g/kg)组、血管软化丸高剂量+ML385(0.03 g/kg)组、铁死亡抑制剂(1 mg/kg)组,每组10只,连续干预6周.采用全自动血脂分析仪检测血脂水平[甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)],油红O染色观察主动脉脂质沉积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉窦组织形态学变化,比色法检测各组小鼠血清中Fe2+、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫荧光观察各组小鼠主动脉窦铁蛋白重链(FTH1)和铁蛋白轻链(FTL)蛋白表达,蛋白质印迹法检测小鼠主动脉组织Nrf2、xCT、GPX4蛋白水平,透射电镜观察主动脉线粒体超微结构改变.结果 与正常组比较,模型组小鼠主动脉可见明显脂质斑块沉积、主动脉窦钙化病变严重,血清TC、TG、LDL-C、Fe2+、MDA水平均升高,HDL-C、SOD、GSH水平下降(P<0.01),主动脉组织Nrf2、xCT、GPX4蛋白及铁储存蛋白FTH1、FTL表达下降(P<0.01),线粒体结构形态损伤严重;与模型组比较,血管软化丸低、高剂量组及铁死亡抑制剂组小鼠治疗后主动脉斑块面积占比下降、主动脉窦钙化病变减轻,血清TC、TG、LDL-C、Fe2+、MDA水平下降,HDL-C、SOD、GSH水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),主动脉组织Nrf2、xCT、GPX4蛋白及铁储存蛋白FTH1、FTL阳性表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),线粒体结构趋近正常;与血管软化丸高剂量组比较,血管软化丸高剂量+ML385组小鼠血脂及脂质过氧化水平有所增加,主动脉组织Nrf2、xCT、GPX4蛋白及铁储存蛋白FTH1、FTL阳性表达下降(P<0.01),线粒体结构损伤,可逆转血管软化丸对AS小鼠的治疗作用.结论 血管软化丸可改