土贝母苷乙通过诱导铁自噬抑制非小细胞肺癌细胞增殖 - 杨翘伊; 张春云; 孙硕; 李文敏; 黄鑫; 梁艳; 张伟伟; 李怀永; 杨清竹 (中国病理生理杂志, 2024)
R363.2%R285%R730.23; 目的:探讨土贝母苷乙(tubeimoside II,TBMS II)诱导非小细胞肺癌细胞铁死亡的作用及潜在的分子机制.方法:体外培养非小细胞肺癌细胞H460,MTT法检测不同TBMS II剂量处理的H460细胞的存活率,根据药物对细胞的抑制率的计算结果,选择细胞存活率50%的TBMS II剂量为参照进行后续实验;Transwell实验检测细胞的迁移能力,克隆形成实验检测TBMS II对H460细胞增殖的影响.流式细胞仪及荧光显微镜检测H460细胞中脂质活性氧(lipid reactive oxygen species,lipid ROS)水平的变化;试剂盒检测细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、总抗氧能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和Fe2+水平;Western blot法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione per-oxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 membrane 11,SLC7A11)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、自噬蛋白P62和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达;透射电镜检测细胞中线粒体结构的变化;免疫荧光实验检测细胞中LC3分别与FTH1和NCOA4的共定位,同时检测LC3和NCOA4与溶酶体的共定位.结果:与对照组比较,随着TBMS II药物浓度增大,H460细胞的存活率、迁移能力以及克隆形成数量逐渐降低且细胞内部出现空泡;H460细胞中加入TBMS II作用后,细胞中GSH和T-AOC水平降低而MDA水平升高,并且细胞中抗氧化蛋白SLC7A11和GPX4蛋白表达下降;H460细胞中的lipid ROS水平以及Fe2+随着TBMS II浓度的升高而升高,而TBMS II诱导的细胞死亡能够被铁死亡抑制剂Fer-1所逆转;自噬标志蛋白LC3 II/LC3 I和P62的水平随着TBMS II浓度的增加而升高,且TBMS II对H460细胞的线粒体形态产生影响,并且随着TBMS II浓度的增加细胞中线粒体荧光强度降低;H460细胞中