CRISPR/Cas13b系统对猪流行性腹泻病毒增殖的抑制作用

S813.3; [目的]猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种对养猪业造成巨大损失的高致死率的传染性疫病.CRISPR/Cas13b系统精准切割和编辑RNA的功能提供了一种靶向抑制RNA病毒的策略.本研究尝试利用CRISPR/Cas13b的RNA干扰功能对PEDV的基因组RNA进行切割,以探索一种新型的PEDV病毒抑制策略.[方法]设计了4对靶向PEDV基因组不同区域的CRISPR RNA(crRNA)位点,构建了CRISPR/Cas13b打靶载体,以打靶载体转染Vero细胞,并利用PEDV感染转染细胞,检测PED...

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Published in华南农业大学学报 Vol. 40; no. 6; pp. 1 - 7
Main Authors 梅彦, 杨化强, 吴珍芳
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 温氏研究院,广东 云浮 527400 01.11.2019
华南农业大学 动物科学学院,广东 广州,510642%华南农业大学 动物科学学院,广东 广州 510642
Subjects
打靶质粒
基因编辑
猪
RNA病毒
CRISPR/Cas13b系统
猪流行性腹泻病毒
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ISSN1001-411X
DOI10.7671/j.issn.1001-411X.201811022

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Summary:S813.3; [目的]猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种对养猪业造成巨大损失的高致死率的传染性疫病.CRISPR/Cas13b系统精准切割和编辑RNA的功能提供了一种靶向抑制RNA病毒的策略.本研究尝试利用CRISPR/Cas13b的RNA干扰功能对PEDV的基因组RNA进行切割,以探索一种新型的PEDV病毒抑制策略.[方法]设计了4对靶向PEDV基因组不同区域的CRISPR RNA(crRNA)位点,构建了CRISPR/Cas13b打靶载体,以打靶载体转染Vero细胞,并利用PEDV感染转染细胞,检测PEDV在CRISPR/Cas13b转染细胞内的增殖情况.[结果]CRISPR/Cas13b系统对PEDV在Vero细胞的增殖具有明显的抑制作用.打靶载体U6-crRNA3和U6-crRNA4转染组相较于正常细胞组,病毒免疫荧光试验中荧光团明显减少;定量PCR结果显示,打靶载体转染组在细胞水平抑制50％ 以上病毒增殖量.[结论]本研究构建的CRISPR/Cas13b系统能有效抑制PEDV增殖,为开发有效的RNA病毒防控手段、建立抗病动物模型提供了新的研究策略.
ISSN:1001-411X
DOI:10.7671/j.issn.1001-411X.201811022