桃Pp4CL2基因的克隆及抗寒功能验证 - 李小兰; 郝兰兰; 张帆; 王鸿 (西北植物学报, 2022)
Q785%Q786%Q789; 基于'丁家坝李光桃'抗寒转录组数据,采用RT-PCR技术克隆桃4-香豆酸辅酶A连接酶基因(Pp4CL2),并对其进行生物信息学及转化模式植物拟南芥和烟草的抗寒分析,以解析'丁家坝李光桃'的抗寒机制.结果显示:(1)成功克隆获得桃Pp4CL2基因(登录号:LOC18792923),其cDNA序列为1635 bp,编码544个氨基酸残基,具有4CL基因家族保守结构域.(2)二级结构分析显示,Pp4CL2蛋白由4种状态的二级结构组成,其中α螺旋占30.51％、β-折叠占7.35％、不规则卷曲及延伸链分别占41.54％和20.59％.(3)顺式作用元件分析发现,Pp4CL2基因上游启动子区含有光、低温以及多种激素响应元件.(4)序列系统进化分析显示,桃Pp4CL2与杏(Prunus armeniaca)、欧洲甜樱桃(Prunus avium)和梅(Prunus mume)的蛋白相似性最高,分别为99.08％、97.98％和96.14％.(5)成功构建转化载体Pp4CL2-pRI101,对拟南芥和烟草进行遗传转化并通过PCR鉴定获得转基因拟南芥和烟草.(6)与野生型相比,低温胁迫下转基因拟南芥和烟草的Pp4CL2基因相对表达量高,受冷害程度轻,具有更高的渗透调节物质含量和抗氧化酶活性,对低温具有更强的耐受性.研究表明,过表达Pp4CL2基因可增强植物对低温的耐受性,推测Pp4CL2基因在'丁家坝李光桃'响应低温胁迫过程中具有重要作用.