MASH1介导肾上腺髓质嗜铬细胞发生神经元转分化 - 彭婀敏; 胡成平; 冯俊涛; 贺若曦 (中南大学学报（医学版）, 2023)
目的:肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla chromaffin cells,AMCCs)在神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导下向神经元转分化,引起肾上腺素分泌减少,其可能参与了支气管哮喘的发病.神经分化发育的关键因子哺乳动物无刚毛-鳞甲同源物(mammalian achaete scute-homologous 1,MASH1)在神经元转分化的AMCCs中升高.本研究拟探讨MASH1对AMCCs神经元转分化的影响及机制.方法:分离并培养大鼠AMCCs,用siMASH1、MASH1过表达质粒转染,再用NGF和/或地塞米松、MAPK激酶-1抑制剂PD98059刺激48 h.在光镜及电镜下观察AMCCs形态.用免疫荧光法检测酪氨酸羟化酶和肾上腺素合成关键酶苯乙醇胺-N-甲基转移酶(phenylethanolamine-N-methyltransferase,PNMT)水平,蛋白质印迹法检测AMCCs中PNMT、MASH1、外周蛋白、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)及磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,pERK)、JMJD3的蛋白质水平,Real-time RT-PCR法检测MASH1、JMJD3的mRNA水平,ELISA法检测细胞上清液中肾上腺素水平.结果:培养的细胞经免疫荧光染色示酪氨酸羟化酶和PNMT均为阳性,鉴定为AMCCs.NGF处理后AMCCs出现细胞突起,pERK、外周蛋白、MASH1蛋白表达量均显著上升(均P<0.05);PNMT蛋白表达和肾上腺素分泌水平下降(均P<0.01).MASH1干扰逆转了NGF的作用,使AMCCs中PNMT蛋白和肾上腺素水平升高,外周蛋白及细胞突起数量减少(P<0.01).过表达MASH1可使细胞突起、外周蛋白表达量显著增加(均P<0.01),PNMT蛋白和肾上腺素水平下降(均P<0.01).与NGF组对比,NGF+PD98059组AMCCs中MASH1、JMJD3蛋白及mRNA水平均下降(均P<0.05).经过PD98059和地塞米松处理后,NGF促进AMCCs转分化的作用受到抑制,细胞突起数量及肾上腺素水平均下降(均P<0.05);此外,NGF激活的p