基于pyrF的乳酸乳球菌食品级表达载体的构建

TS201.3; 基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产.首先,利用NZ3900pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后,分别以来源于L.lactis的repA和repC基因为复制元件、pyrF基因为筛选标记、P32和P8为启动子、以及Tusp45和TpepN为终止子,构建食品级表达质粒pLD;最后以绿色荧光蛋白ZsGreen为报告基因,验证ZsGreen在NZ3900ΔpyrF突变株的表达及pLD-ZsG的遗传...

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Published in食品工业科技 Vol. 45; no. 9; pp. 124 - 130
Main Authors 王帅, 邓木兰, 梁志成, 周泓宇, 何少媚, 张智, 穆云萍, 李芳红, 赵子建
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广东工业大学生物医药研究院,广东广州 510006%华南理工大学医学院,广东广州 510006%深圳大学生命与海洋科学学院,广东深圳 518060 01.05.2024
Subjects
Lactococcus lactis
绿色荧光蛋白
food-grade expression vector
乳酸乳球菌
食品级表达载体
pyrF
筛选标记
selective marker
green fluorescent protein
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ISSN1002-0306
DOI10.13386/j.issn1002-0306.2023060149

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Summary:TS201.3; 基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产.首先,利用NZ3900pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后,分别以来源于L.lactis的repA和repC基因为复制元件、pyrF基因为筛选标记、P32和P8为启动子、以及Tusp45和TpepN为终止子,构建食品级表达质粒pLD;最后以绿色荧光蛋白ZsGreen为报告基因,验证ZsGreen在NZ3900ΔpyrF突变株的表达及pLD-ZsG的遗传稳定性.实验结果表明,原养型ZsGreen阳性转化子可在普通Elliker培养基中正常生长,在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光信号;此外,PCR和Western blotting也证实ZsGreen能在NZ3900中表达且能稳定传代至30代,说明pLD食品级表达载体构建成功且使得外源蛋白在L.lactis中稳定表达.综上所述,基于pyr-F营养缺陷型标记构建的L.lactis食品级表达载体的方法切实可行,可为推动L.lactis在食品和药用多肽生产中的应用提供研究基础.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2023060149