温度响应的黄曲霉毒素B1纳米抗体重组表达、复性及生物活性

• Published in: 食品科学 Vol. 44; no. 18; pp. 141 - 148
• Main Authors: 张乐平, 涂追, 李燕萍, 李小江, 帅文苑, 张航, 何庆华
• Format: Magazine Article
• Language: Chinese
• Published: 南昌大学食品学院,江西南昌 330047%南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室,江西南昌 330047%南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室,江西南昌 330047 2023; 南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室,江西南昌 330047; 南昌大学中德联合研究院,江西南昌 330047
• Subjects: 类弹性蛋白; elastin-like peptide; inverse transition cycling; 包涵体复性; 可逆相变循环; nanoantibody; 纳米抗体; 融合表达; fusion expression; inclusion body renaturation
• ISSN: 1002-6630
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20221028-289

Q81; 将不同长度类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptide,ELP)与纳米抗体融合表达,获得具有温度响应能力的抗黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)纳米抗体.采用递归定向连接克隆得到重组表达载体pET30a-G8-ELP20、pET30a-G8-ELP40、pET30a-G8-ELP60、pET30a-G8-ELP80,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示4种融合蛋白均以不溶性包涵体形式存在于菌体沉淀中,对其进行变性处理后,分别采用稀释复性、可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)纯化、透析复性、柱上复性4种方式对包涵体蛋白进行复性.SDS-PAGE分析4种复性方式分别获得的4种融合蛋白,结果显示其纯度差异不显著,但ITC纯化蛋白得率最高,分别为83％、90.7％、89.5％、88.3％;间接竞争酶联免疫吸附实验测定复性后融合蛋白活性,结果表明由稀释复性法获得的G8-ELP80重组蛋白IC50最低(4.35ng/mL);浊度分析法测得融合不同长度ELP标签纳米抗体的相变温度分别为45、38、32、28 ℃;圆二色谱分析显示4种融合蛋白二级结构均以β-折叠、β-转角为主,与预估结果相符.本研究将ELP标签与抗AFB1纳米抗体融合表达,实现了纳米抗体的温度刺激响应性,系统比较了不同复性方式对蛋白特性的影响,为后续AFB1检测分析提供了基础.