肺腺癌转移相关转录本1诱导肺癌HCC827细胞对奥希替尼耐药的作用机制 - 康小红; 高园园; 王颖; 崔艳慧; 赵可雷; 寇卫政; 苗战会; 曹飞; 龚亚斌 (中华肿瘤杂志, 2019)
目的 探讨肺腺癌转移相关转录本1( MALAT1)和奥希替尼对肺癌细胞HCC827增殖和凋亡的影响以及MALAT1介导奥希替尼耐药的机制.方法 应用LV?vector和LV?over／MALAT1转染HCC827细胞,建立稳定细胞株HCC827／Vector和HCC827／MALAT1.应用短发夹RNA阴性对照(shRNA?NC)、shRNA人表皮生长因子受体3( shRNA?ERBB3)转染HCC827／MALAT1细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MALAT1、奥希替尼和shRNA?ERBB3对细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测MALAT1、奥希替尼和shRNA?ERBB3对细胞凋亡的影响.应用Western blot检测MALAT1、奥希替尼和shRNA?ERBB3作用后,肺癌细胞中表皮生长因子受体( EGFR)和ERBB3信号通路相关蛋白的表达.结果 MTT结果显示,奥希替尼对HCC827／MALAT1细胞增殖的抑制作用显著降低,半数抑制浓度(IC50)＞4 000 nmol／L;但干扰ERBB3后,HCC827／MALAT1细胞对奥希替尼再次敏感,IC50为(17.27±3.21)nmol／L.细胞凋亡实验显示,10 nmol／L奥希替尼干预HCC827／MALAT1细胞后,凋亡率为(8.38±0.92)%;但干扰ERBB3后,奥希替尼能促进HCC827／MALAT1细胞凋亡,凋亡率为(27.17± 5.83)%,差异有统计学意义( P＜0.01);Western blot检测结果显示,HCC827／MALAT1细胞中磷酸化ERBB3(p?ERBB3)、p?AKT和p?ERK蛋白明显上调,奥希替尼能抑制磷酸化EGFR(p?EGFR)蛋白的表达,但对p?ERBB3、p?AKT和p?ERK蛋白的表达无影响.敲减ERBB3后,奥希替尼能下调p?EGFR、p?ERBB3、p?AKT和p?ERK蛋白的表达水平.结论 MALAT1可能是通过激活ERBB3／PI3K／AKT和ERBB3／MAPK／ERK信号通路介导了奥希替尼耐药.