抗大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体的制备及其间接ELISA检测方法的建立 - 李硕; 陈静妮; 赵立宁; 黄春萍; 黄锦炉; 王贵平; 仲颖 (南方水产科学, 2024)
S943; 大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展.为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡,制备了抗LMBV卵黄抗体;通过筛选捕获物浓度、包被条件和封闭条件,建立了抗LMBV卵黄抗体的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法;使用构建的方法,评估了 LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后卵黄抗体的效价消减规律.结果表明,1‰(φ)β-丙内酯4℃作用72 h可完全灭活LMBV.间接ELISA反应中,每孔包被105TCID50灭活病毒,37℃孵育2 h后,使用5％(ψ)牛血清白蛋白37℃封闭2h,可有效降低阴性对照组卵黄抗体的背景值;此外,所建立的检测方法与杂交醴弹状病毒卵黄抗体、未免疫的蛋黄提取物和空白细胞不存在交叉反应,特异性较高.LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡约48 d可产生特异性卵黄抗体,免疫后58 d效价升高至峰值(1∶12 800),峰值水平可持续至免疫后128 d.所构建的LMBV卵黄抗体检测方法,可实时监测LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后的特异性卵黄抗体效价水平的变化规律,确定LMBV卵黄抗体的高效免疫程序及高免蛋收集持续期,为LMBV卵黄抗体产品的开发、应用及LMBV的防治提供了新思路.