嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响 - 曾静; 何础阔; 郭建军; 侯安伟; 聂俊辉; 袁林 (食品科学, 2022)
Q814; 对嗜热酸性m型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响.TK-PUL保守基序II中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其a-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低.动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的kcat/Km值基本不变,以异潘糖为底物的kcat/Km值约为TK-PUL的64.78％.结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用.TK-PUL中I500W位点变化不影响其a-l,4-糖苷键水解活性,但使其α-1,6-糖苷键水解活性明显降低.本研究有助于深入理解TK-PUL的双功能催化机制,也可为TK-PUL的分子改造提供理论依据和设计思路.