长链非编码RNA H19促进血管钙化:基于抑制Bax抑制因子1/视神经萎缩蛋白1通路 - 陈韦任; 杜辉; 沙媛; 周玉杰; 梁静; 陈韵岱; 马茜; 吴雪萍; 钱赓 (Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University, 2023)
目的 探讨长链非编码RNA H19(lncRNA H19)是否通过抑制Bax抑制因子1/视神经萎缩蛋白1(BI-1/OPA1)通路促进钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡,进而诱导血管钙化.方法 β磷酸甘油和氯化钙药物诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)建立细胞钙化模型,将细胞分为5组:对照组(普通培养基培养14d)、钙化组(钙化培养基培养14d)、钙化+siH19组(敲低lncRNA H19表达后钙化培养基培养14d)、钙化+siH19+BI-1-/-组(敲低lncRNA H19和BI-1表达后钙化培养基培养14d)和钙化+siH19+ OPA1-/-组(敲低lncRNA H19和OPA1表达后钙化培养基培养14d).另ApoE-/-糖尿病小鼠使用高脂饲料喂养32周建立动物钙化模型.通过茜素红S染色和von Kossa染色检测钙沉积,通过Western blotting测定Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)观察细胞骨型分化,通过TUNEL染色和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3检测观察细胞凋亡情况.结果 血管钙化后,lncRNA H19表达明显上升,BI-1和OPA1表达明显下降,而siRNA敲低lncRNA H19表达后,BI-1和OPA1蛋白表达明显上升;抑制BI-1后,OPA1再次下降(P<0.001).siRNA敲低lncRNA H19表达后,钙化结节消失,钙含量、Runx-2、BMP-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和细胞凋亡率均显著降低(P<0.001).siRNA敲低lncRNA H19基础上再抑制BI-1或OPA1蛋白,钙化结节出现,钙含量、Runx-2、BMP-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和细胞凋亡率均显著增加(P<0.001).结论 LncRNA H19通过抑制BI-1/OPA1蛋白通路诱导血管钙化,其可能机制和促进钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡有关.