衍生化-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中维生素D和25-羟基维生素D

• Published in: Sepu Vol. 43; no. 3; pp. 228 - 236
• Main Authors: 刘宇, 谢继辉, 章萍萍, 周迪, 赵维克, 张居舟
• Format: Journal Article
• Language: Chinese; English
• Published: No. 457, Zhongshan Road, Shahekou District, Dalian City, Liaoning Province 安徽省食品药品检验研究院,国家农副加工食品质量检验检测中心,安徽 合肥 230051 08.03.2025; Editorial board of Chinese Journal of Chromatography
• Subjects: a; 衍生化反应; 维生素D; 超高效液相色谱; 串联质谱; 25-hydroxyvitamin D; 4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮; vitamin D; tandem mass spectrometry(MS/MS); derivatization; 4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione(PTAD); 25-羟基维生素D; ultra performance liquid chromatography(UPLC)
• ISSN: 1000-8713; 1872-2059
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.02003

O658; 动物源性食品是人体摄入维生素D和 25-羟基维生素D的重要食物来源.目前我国相关标准限于维生素D的含量测定,使用非衍生化方法进行检测.本研究以 4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)作为衍生试剂,通过Diels-Alder反应,在维生素D和25-羟基维生素D上引入易电离基团,提高离子化效率,建立了衍生化-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定动物源性食品中维生素D和 25-羟基维生素D的检测方法.本研究对衍生化条件、样品前处理条件、色谱分离条件和质谱检测条件进行了优化.结果表明,在乙腈溶剂中,目标化合物与衍生试剂PTAD质量比为1∶10000 的条件下,衍生反应充分;衍生反应1h后达到稳定;相较于Silica和C18固相萃取(SPE)柱,HLB SPE柱对目标化合物的回收率更高,同时可有效降低基质效应的影响;在水-甲醇流动相体系中添加 5 mmol/L甲胺,可显著提升目标化合物的检测灵敏度.样品经过均质,加入同位素内标,碱液皂化,萃取浓缩,固相萃取柱净化和化学衍生,在 Waters Acquity UPLC BEH C18 色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)上,以0.1%甲酸-5 mmol/L甲胺水溶液和 0.1%甲酸-5 mmol/L甲胺甲醇溶液作为流动相梯度洗脱.分析物在电喷雾正离子模式(ESI+)下进行多反应监测(MRM)测定,内标法定量.结果表明,维生素D和 25-羟基维生素D在 0.2～50 μg/L内线性良好,相关系数为 0.9995～0.9999,方法检出限为 0.018～0.066 μg/kg,方法定量限为 0.06～0.22 μg/kg,在 0.20、1.0、5.0 μg/kg 3 个加标水平下,加标回收率为 92.6%～99.4%,相对标准偏差为 3.6%～6.2%.该方法灵敏度高,重复性好,适用于动物源性食品中维生素D和 25-羟基维生素D灵敏、准确的定量检测.