PCR－SSP法を用いたHPA遺伝子タイピングの検討

＜目的＞ 現在, 当センターにおける血小板登録者及び医療機関からの依頼検査の血小板型タイピングは, MPHA法による血清学的検査と市販キットによる遺伝子学的検査を主体としている. しかし, 近年血小板抗体の抗血清の入手が極めて困難な状況であり, 更に依頼検査においては検査に十分な血液量が得られないなど遺伝子学的検査に頼らざるを得ない状況が多い. そこで現在HLAを始め様々な血液型のタイピングに広く用いられているPCR－SSP法を当センターの血小板検査にも導入し, HPA－1～5を同時により簡便にタイピングすることを試みた. ＜方法＞ 血液型検査用検体のBuffy coatよりPK処理～フェノー...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in日本輸血学会雑誌 Vol. 47; no. 2; p. 231
Main Authors 佐久間香, 梅津昭子, 斎藤敏雄, 中島文明, 松原賢弘, 横田敏和, 諏訪城三
Format Journal Article
LanguageJapanese
Published 日本輸血学会 01.04.2001
Online AccessGet full text
ISSN0546-1448

Cover

Abstract ＜目的＞ 現在, 当センターにおける血小板登録者及び医療機関からの依頼検査の血小板型タイピングは, MPHA法による血清学的検査と市販キットによる遺伝子学的検査を主体としている. しかし, 近年血小板抗体の抗血清の入手が極めて困難な状況であり, 更に依頼検査においては検査に十分な血液量が得られないなど遺伝子学的検査に頼らざるを得ない状況が多い. そこで現在HLAを始め様々な血液型のタイピングに広く用いられているPCR－SSP法を当センターの血小板検査にも導入し, HPA－1～5を同時により簡便にタイピングすることを試みた. ＜方法＞ 血液型検査用検体のBuffy coatよりPK処理～フェノール処理～エタノール沈殿にてDNAを抽出し, DNA量100ng／μl前後になるように調整した. NIBSCによる文献及び第10回JPWSにて実施した資料をもとにprimerを作成し, 96穴のマイクロプレートを用い, PE9700にて増幅したもので判定できるように条件を調整していった. 10%アクリルアミドゲルにて200Vで40分泳動し, 1%エチジウムブロマイドにて10分染色後UVイルミネーターを用いて撮影し, バンドの有無を確認した. （検体は予めMPHA法及び市販キットにてタイピングしたものを任意に複数選んで使用した. ） ＜結果および考察＞ 各検体ともHPA－1～5の増幅バンドが検出され, 他法と比べ結果の相違はみられなかった. 当初は同一条件下でもサーマルサイクラーの機種によって検出されるバンドの強弱が認められ, HPA－5に関しては判定不可能な程であった. しかしPCR条件等を徐々に改良した結果, 各増幅バンドが検出可能となり判定可能なシステムとなった. 今回の結果より血小板検査において微量検体で簡便なPCR－SSP法は極めて有用であると思われる. 今後も引き続きアガロースゲルの使用など更なる検討を進めていきたい.
AbstractList ＜目的＞ 現在, 当センターにおける血小板登録者及び医療機関からの依頼検査の血小板型タイピングは, MPHA法による血清学的検査と市販キットによる遺伝子学的検査を主体としている. しかし, 近年血小板抗体の抗血清の入手が極めて困難な状況であり, 更に依頼検査においては検査に十分な血液量が得られないなど遺伝子学的検査に頼らざるを得ない状況が多い. そこで現在HLAを始め様々な血液型のタイピングに広く用いられているPCR－SSP法を当センターの血小板検査にも導入し, HPA－1～5を同時により簡便にタイピングすることを試みた. ＜方法＞ 血液型検査用検体のBuffy coatよりPK処理～フェノール処理～エタノール沈殿にてDNAを抽出し, DNA量100ng／μl前後になるように調整した. NIBSCによる文献及び第10回JPWSにて実施した資料をもとにprimerを作成し, 96穴のマイクロプレートを用い, PE9700にて増幅したもので判定できるように条件を調整していった. 10%アクリルアミドゲルにて200Vで40分泳動し, 1%エチジウムブロマイドにて10分染色後UVイルミネーターを用いて撮影し, バンドの有無を確認した. （検体は予めMPHA法及び市販キットにてタイピングしたものを任意に複数選んで使用した. ） ＜結果および考察＞ 各検体ともHPA－1～5の増幅バンドが検出され, 他法と比べ結果の相違はみられなかった. 当初は同一条件下でもサーマルサイクラーの機種によって検出されるバンドの強弱が認められ, HPA－5に関しては判定不可能な程であった. しかしPCR条件等を徐々に改良した結果, 各増幅バンドが検出可能となり判定可能なシステムとなった. 今回の結果より血小板検査において微量検体で簡便なPCR－SSP法は極めて有用であると思われる. 今後も引き続きアガロースゲルの使用など更なる検討を進めていきたい.
Author 松原賢弘
中島文明
横田敏和
斎藤敏雄
梅津昭子
諏訪城三
佐久間香
Author_xml – sequence: 1
  fullname: 佐久間香
– sequence: 2
  fullname: 梅津昭子
– sequence: 3
  fullname: 斎藤敏雄
– sequence: 4
  fullname: 中島文明
– sequence: 5
  fullname: 松原賢弘
– sequence: 6
  fullname: 横田敏和
– sequence: 7
  fullname: 諏訪城三
BookMark eNotjz9Lw0Achm-oYK39KIHf_c0FXEqoVigYbPdwl16gIV6g0Q-Q1FURqZvSpUMXRegmBT_MadXJr2BRl_fZnod3DzVsYU0DNYEz4WHG5C5ql2UGAFhiKThrooMoPP1eXw0G0WZ15-rbj9nSVZeumveizlf18rZ-eH-8cfWrqxduOnPTlaufXfW0Wdx_Lq_30U6q8tK0_9lCw8PuMOx5_ZOj47DT9zIpAs_olIwg8VUQCJ5Qw4TxDSU41UZpxYJECyEY0xwIKOxTwJxzpSnT2peaatpC3T_tmRmNE5UXNh9bE2fFxcRus3GS8POJsmVMtsdiAOYDiTFhMRCKf0di8AP6A2QdXto
ContentType Journal Article
CorporateAuthor 神奈川県赤十字血液センター検査部検査一課
CorporateAuthor_xml – name: 神奈川県赤十字血液センター検査部検査一課
DatabaseTitleList
DeliveryMethod fulltext_linktorsrc
EndPage 231
ExternalDocumentID cc5trans_2001_004702_124_0231_023181079
GroupedDBID ALMA_UNASSIGNED_HOLDINGS
JSF
KQ8
MOJWN
RJT
ID FETCH-LOGICAL-j869-ebf2d0c7a9965c3e46e7e321fbeaba49cb66644b5020a17301555ab34bb78b3b3
ISSN 0546-1448
IngestDate Wed Apr 09 06:37:11 EDT 2025
IsPeerReviewed false
IsScholarly true
Issue 2
Language Japanese
LinkModel OpenURL
MergedId FETCHMERGED-LOGICAL-j869-ebf2d0c7a9965c3e46e7e321fbeaba49cb66644b5020a17301555ab34bb78b3b3
PageCount 1
ParticipantIDs medicalonline_journals_cc5trans_2001_004702_124_0231_023181079
PublicationCentury 2000
PublicationDate 2001-04-01
PublicationDateYYYYMMDD 2001-04-01
PublicationDate_xml – month: 04
  year: 2001
  text: 2001-04-01
  day: 01
PublicationDecade 2000
PublicationTitle 日本輸血学会雑誌
PublicationYear 2001
Publisher 日本輸血学会
Publisher_xml – name: 日本輸血学会
SSID ssj0001818654
ssib005879765
ssib000872077
ssib058493955
Score 1.5495538
Snippet ＜目的＞ 現在, 当センターにおける血小板登録者及び医療機関からの依頼検査の血小板型タイピングは, MPHA法による血清学的検査と市販キットによる遺伝子学的検査を主...
SourceID medicalonline
SourceType Publisher
StartPage 231
Title PCR－SSP法を用いたHPA遺伝子タイピングの検討
URI http://mol.medicalonline.jp/en/journal/abstract?GoodsID=cc5trans/2001/004702/124&name=0231-0231j
Volume 47
hasFullText 1
inHoldings 1
isFullTextHit
isPrint
journalDatabaseRights – providerCode: PRVAFT
  databaseName: Open Access Digital Library
  issn: 0546-1448
  databaseCode: KQ8
  dateStart: 19580101
  customDbUrl:
  isFulltext: true
  dateEnd: 20061231
  titleUrlDefault: http://grweb.coalliance.org/oadl/oadl.html
  omitProxy: true
  ssIdentifier: ssj0001818654
  providerName: Colorado Alliance of Research Libraries
link http://utb.summon.serialssolutions.com/2.0.0/link/0/eLvHCXMwpR1NaxQxNLQ9KSKKit_0YI4jO5NkkgcizOzOsliU1a7Q2zIZs4eCFXR78bZbr4pIvSleeuhFEXqTgj9mtOrJv-BLJrOdBQ-1Xoa32TfvveTNm_deJnkh5IaUBXDIeaDjEQTcxCYA9FqBrduCHknEMrdfdO_ei3sP-Z01sbawuNJYtbQ51jeL53_dV3IcrWIb6tXukv0Hzc6IYgPCqF-8oobxeiQd99sPaNalaZuqzupqn2YxTRkFQTNGVUQhopmkwGmiXEtIFfcAdHv9hGZg4RQBbolAh2aCJh0KLU8h7XogqW5klloFICOP0_I0k8wKgJjQppmyTFXWjH3tvyBpIhzQpolDQ76pcvihXXVRCZDEtUhOSEgphA4noWo2retQKmERwK4Ih4u0mQWQBsAhLkoWORQcI14LoSyzus9NXKSiMsvRCsxdi6Cq64VRfE6GmgoOSRrXd0vPwI9BPbESNtbjWFM43qA0Xt-CxwGmq6rpa6rqot6moqbj8L7QzP-aqwReFGJsAxh7dGg4tHU-W9EQ47OhreHnLgqTeVgkiyy0h3ms3G9G2jJqNbccK4mB6OxVjmEoMPBblN30pK106M4QnPXjJDn1uPp4WBVxacRhgzPktE-glpPKGs6ShfX8HLmFlvB7_yXawMHe23L65sf2bjl5UU4-4FP-a_Ll2_777x9fl9Ov5XSn3Nout_bK6edy8ulg593P3VfnyaCbDdq9wJ8LEqyrGAKjR9GjViFzTNVFwQyPjTQsCkfa5DrnUGhMyTnXAjOhPLQeTAiRa8a1lkozzS6QpY0nG-YiWY4Lhg4NFOdFzo3hYEI2KkxhuJTxiOlL5PZcl4fe-J8Nj6iLy_9L4Ao5cfhsXiVL46eb5hqGwWN93Sn4Dy1Xg5Y
linkProvider Colorado Alliance of Research Libraries
openUrl ctx_ver=Z39.88-2004&ctx_enc=info%3Aofi%2Fenc%3AUTF-8&rfr_id=info%3Asid%2Fsummon.serialssolutions.com&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.atitle=PCR%EF%BC%8DSSP%E6%B3%95%E3%82%92%E7%94%A8%E3%81%84%E3%81%9FHPA%E9%81%BA%E4%BC%9D%E5%AD%90%E3%82%BF%E3%82%A4%E3%83%94%E3%83%B3%E3%82%B0%E3%81%AE%E6%A4%9C%E8%A8%8E&rft.jtitle=%E6%97%A5%E6%9C%AC%E8%BC%B8%E8%A1%80%E5%AD%A6%E4%BC%9A%E9%9B%91%E8%AA%8C&rft.au=%E4%BD%90%E4%B9%85%E9%96%93%E9%A6%99&rft.au=%E6%A2%85%E6%B4%A5%E6%98%AD%E5%AD%90&rft.au=%E6%96%8E%E8%97%A4%E6%95%8F%E9%9B%84&rft.au=%E4%B8%AD%E5%B3%B6%E6%96%87%E6%98%8E&rft.date=2001-04-01&rft.pub=%E6%97%A5%E6%9C%AC%E8%BC%B8%E8%A1%80%E5%AD%A6%E4%BC%9A&rft.issn=0546-1448&rft.volume=47&rft.issue=2&rft.spage=231&rft.epage=231&rft.externalDocID=cc5trans_2001_004702_124_0231_023181079
thumbnail_l http://covers-cdn.summon.serialssolutions.com/index.aspx?isbn=/lc.gif&issn=0546-1448&client=summon
thumbnail_m http://covers-cdn.summon.serialssolutions.com/index.aspx?isbn=/mc.gif&issn=0546-1448&client=summon
thumbnail_s http://covers-cdn.summon.serialssolutions.com/index.aspx?isbn=/sc.gif&issn=0546-1448&client=summon