Real-time PCRを用いたHTLV-1遺伝子定量法の確立
臓器移植では，レシピエントがドナーから持ち込まれたウイルスによって移植後に重大な感染症による合併症を引き起こすことが知られている。そのため，移植禁忌とされているヒトT細胞白血病ウイルスI型（human T-cell leukemia virus type 1; HTLV-1）などの感染症は，移植前検査を行い感染の有無を確認することが重要である。ただし，生体腎移植では，移植前からHTLV-1に感染していたレシピエントにHTLV-1感染ドナーからの臓器提供は禁忌とされてはいない。そのため，HTLV-1の定量は感染リスクを評価する上で必要であると筆者らは考えている。本研究では，HTLV-1のラインブ...
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| Published in | 医学検査 Vol. 73; no. 3; pp. 423 - 431 |
|---|---|
| Main Authors | , , , , , , , |
| Format | Journal Article |
| Language | Japanese |
| Published |
一般社団法人 日本臨床衛生検査技師会
25.07.2024
日本臨床衛生検査技師会 |
| Subjects | |
| Online Access | Get full text |
| ISSN | 0915-8669 2188-5346 |
| DOI | 10.14932/jamt.23-108 |
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| Abstract | 臓器移植では，レシピエントがドナーから持ち込まれたウイルスによって移植後に重大な感染症による合併症を引き起こすことが知られている。そのため，移植禁忌とされているヒトT細胞白血病ウイルスI型（human T-cell leukemia virus type 1; HTLV-1）などの感染症は，移植前検査を行い感染の有無を確認することが重要である。ただし，生体腎移植では，移植前からHTLV-1に感染していたレシピエントにHTLV-1感染ドナーからの臓器提供は禁忌とされてはいない。そのため，HTLV-1の定量は感染リスクを評価する上で必要であると筆者らは考えている。本研究では，HTLV-1のラインブロット法（line blotting assay; LIA）法において判定保留となった場合を想定し，レシピエントおよびドナーの迅速診断に対応するため最終の確定診断となる遺伝子増幅法（real-time polymerase chain reaction; real-time PCR）を用いてHTLV-1遺伝子定量法（quantitative PCR）の確立を目指し検討を行った。Quantitative PCRに必要なstandard curveは，HTLV-1の配列より作成した合成オリゴヌクレオチドDNA fragmentsを使用しthreshold cycle（Ct）値からHTLV-1 DNA量（copies/μL）を算出するようにした。本研究において確立したquantitative PCRは，人工的に作成したDNA fragmentsを使用しているため，安定したHTLV-1の定量化が可能になると筆者らは考えている。 |
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| AbstractList | 臓器移植では，レシピエントがドナーから持ち込まれたウイルスによって移植後に重大な感染症による合併症を引き起こすことが知られている。そのため，移植禁忌とされているヒトT細胞白血病ウイルスI型（human T-cell leukemia virus type 1; HTLV-1）などの感染症は，移植前検査を行い感染の有無を確認することが重要である。ただし，生体腎移植では，移植前からHTLV-1に感染していたレシピエントにHTLV-1感染ドナーからの臓器提供は禁忌とされてはいない。そのため，HTLV-1の定量は感染リスクを評価する上で必要であると筆者らは考えている。本研究では，HTLV-1のラインブロット法（line blotting assay; LIA）法において判定保留となった場合を想定し，レシピエントおよびドナーの迅速診断に対応するため最終の確定診断となる遺伝子増幅法（real-time polymerase chain reaction; real-time PCR）を用いてHTLV-1遺伝子定量法（quantitative PCR）の確立を目指し検討を行った。Quantitative PCRに必要なstandard curveは，HTLV-1の配列より作成した合成オリゴヌクレオチドDNA fragmentsを使用しthreshold cycle（Ct）値からHTLV-1 DNA量（copies/μL）を算出するようにした。本研究において確立したquantitative PCRは，人工的に作成したDNA fragmentsを使用しているため，安定したHTLV-1の定量化が可能になると筆者らは考えている。 「要旨」臓器移植では, レシピエントがドナーから持ち込まれたウイルスによって移植後に重大な感染症による合併症を引き起こすことが知られている. そのため, 移植禁忌とされているヒトT細胞白血病ウイルスI型(human T-cell leukemia virus type 1; HTLV-1)などの感染症は, 移植前検査を行い感染の有無を確認することが重要である. ただし, 生体腎移植では, 移植前からHTLV-1に感染していたレシピエントにHTLV-1感染ドナーからの臓器提供は禁忌とされてはいない. そのため, HTLV-1の定量は感染リスクを評価する上で必要であると筆者らは考えている. 本研究では, HTLV-1のラインブロット法(line blotting assay; LIA)法において判定保留となった場合を想定し, レシピエントおよびドナーの迅速診断に対応するため最終の確定診断となる遺伝子増幅法(real-time polymerase chain reaction; real-time PCR)を用いてHTLV-1遺伝子定量法(quantitative PCR)の確立を目指し検討を行った. Quantitative PCRに必要なstandard curveは, HTLV-1の配列より作成した合成オリゴヌクレオチドDNA fragmentsを使用しthreshold cycle(Ct)値からHTLV-1 DNA量(copies/μL)を算出するようにした. 本研究において確立したquantitative PCRは, 人工的に作成したDNA fragmentsを使用しているため, 安定したHTLV-1の定量化が可能になると筆者らは考えている. |
| Author | 石塚, 敏 小林, 悠梨 海上, 耕平 岩上, 恵梨 笹野, まゆ 石田, 英樹 三浦, ひとみ 細羽, 恵美子 |
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| References | 17) Caterino-de-Araujo A et al.: Short communication: Current prevalence and risk factors associated with human T lymphotropic virus type 1 and human T lymphotropic virus type 2 infections among HIV/AIDS patients in São Paulo, Brazil. AIDS Res Hum Retrovirus, 2015; 31: 543–549. 12) NCBI Primer-BLAST. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/（2023年10月13日アクセス） 22) Kuramitsu M et al.: Development of reference material with assigned value for human T-cell leukemia virus type 1 quantitative PCR in Japan. Microbiology and Immunology, 2018; 62: 673–676. 2) Poiesz BJ et al.: Detection and isolation of type-C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T-cell lymphoma. Proc Natl Acad Sci U S A, 1980; 77: 7415–7419. 8) 園山 里美，他：HTLV-1/2抗体測定試薬「エクルーシス試薬Anti-HTLV I/II」の基礎性能評価．医学検査，2016; 65: 642–648. 16) 豊田 康祐，他：ヒトT細胞白血病ウイルス1型の戦略と病原性．ウイルス，2019; 69: 37–46. 14) Yamauchi J et al.: Risk of human T-cell leukemia virus type 1 infection in kidney transplantation. N Engl J Med, 2019; 380: 296–298. 1) 日本臓器移植ネットワーク：臓器提供者（ドナー）適応基準（2011年3月15日現在）．https://www.jotnw.or.jp/files/page/medical/manual/doc/donor_adjustment_standard.pdf （2023年10月16日アクセス） 3) Satake M et al.: Current prevalence of HTLV-1 in Japan as determined by screening of blood donors. J Med Virol, 2012; 84: 327–335. 13) SnapGene Viewerソフトウェア．https://www.mdf-soft.com/snapgene/snapgene_viewer.html（2023年10月13日アクセス） 6) Ramanan P et al.: Donor-transmitted HTLV-1-associated myelopathy in a kidney transplant recipient-case report and literature review. Am J Transplant, 2014; 14: 2417–2421. 15) National Library of Medicine: Human T-lymphotropic virus 1, complete genome. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_001436.1 （2023年10月13日アクセス） 10) 中村 一人，他：抗ヒトT細胞白血病ウイルス抗体測定試薬「イノリアHTLV」の基礎的検討―抗ヒトT細胞白血病ウイルス抗体測定法―．医学検査，2019; 68: 650–655. 9) Kuramitsu M et al.: Proviral features of human T cell leukemia virus type l in carriers with indeterminate Western blot analysis results. J Clin Microbiol, 2017; 55: 2838–2849. 11) Watanabe M et al.: Dual targeting of transformed and untransformed HTLV-1-infected T cells by DHMEQ, a potent and selective inhibitor of NF-kappaB, as a strategy for chemoprevention and therapy of adult T-cell leukemia. Blood, 2005; 106: 2462–2471. 21) Kusagawa S et al.: Evaluation of human T-cell leukemia virus in vitro diagnostics using plasma specimens collected in Japan. BMC Infect Dis, 2023; 23: 418. 20) Sagara Y et al.: Estimation of the window period of human T-cell leukemia virus type 1 and 2 tests by a lookback study of seroconverters among Japanese voluntary blood donors. Transfusion, 2021; 61: 484–493. 4) Uchiyama T et al.: Adult T-cell leukemia: Clinical and hematologic features of 16 cases. Blood, 1977; 50: 481–492. 5) Osame M et al.: HTLV-Iassociated myelopathy: A new clinical entity. Lancet, 1986; 1: 1031–1032. 18) Kenneth G et al.: Delineation of an immunodominant and human T-cell lymphotropic virus (HTLV)-specific epitope within the HTLV-I transmembrane glycoprotein. Blood, 1995; 86: 1392–1399. 7) Glowacka I et al.: Delayed seroconversion and rapid onset of lymphoproliferative disease after transmission of human T-cell lymphotropic virus type l from a multiorgan donor. Clin Infect Dis, 2013; 57: 1417–1424. 19) シスメックス株式会社：HISCL® HTLV-IAb試薬（添付文書）．https://www.sysmex.co.jp/pdf/documents/0125_RPI.pdf （2023年10月11日アクセス） |
| References_xml | – reference: 4) Uchiyama T et al.: Adult T-cell leukemia: Clinical and hematologic features of 16 cases. Blood, 1977; 50: 481–492. – reference: 17) Caterino-de-Araujo A et al.: Short communication: Current prevalence and risk factors associated with human T lymphotropic virus type 1 and human T lymphotropic virus type 2 infections among HIV/AIDS patients in São Paulo, Brazil. AIDS Res Hum Retrovirus, 2015; 31: 543–549. – reference: 13) SnapGene Viewerソフトウェア．https://www.mdf-soft.com/snapgene/snapgene_viewer.html（2023年10月13日アクセス） – reference: 15) National Library of Medicine: Human T-lymphotropic virus 1, complete genome. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_001436.1 （2023年10月13日アクセス） – reference: 2) Poiesz BJ et al.: Detection and isolation of type-C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T-cell lymphoma. Proc Natl Acad Sci U S A, 1980; 77: 7415–7419. – reference: 19) シスメックス株式会社：HISCL® HTLV-IAb試薬（添付文書）．https://www.sysmex.co.jp/pdf/documents/0125_RPI.pdf （2023年10月11日アクセス） – reference: 1) 日本臓器移植ネットワーク：臓器提供者（ドナー）適応基準（2011年3月15日現在）．https://www.jotnw.or.jp/files/page/medical/manual/doc/donor_adjustment_standard.pdf （2023年10月16日アクセス） – reference: 5) Osame M et al.: HTLV-Iassociated myelopathy: A new clinical entity. Lancet, 1986; 1: 1031–1032. – reference: 12) NCBI Primer-BLAST. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/（2023年10月13日アクセス） – reference: 10) 中村 一人，他：抗ヒトT細胞白血病ウイルス抗体測定試薬「イノリアHTLV」の基礎的検討―抗ヒトT細胞白血病ウイルス抗体測定法―．医学検査，2019; 68: 650–655. – reference: 6) Ramanan P et al.: Donor-transmitted HTLV-1-associated myelopathy in a kidney transplant recipient-case report and literature review. Am J Transplant, 2014; 14: 2417–2421. – reference: 16) 豊田 康祐，他：ヒトT細胞白血病ウイルス1型の戦略と病原性．ウイルス，2019; 69: 37–46. – reference: 8) 園山 里美，他：HTLV-1/2抗体測定試薬「エクルーシス試薬Anti-HTLV I/II」の基礎性能評価．医学検査，2016; 65: 642–648. – reference: 21) Kusagawa S et al.: Evaluation of human T-cell leukemia virus in vitro diagnostics using plasma specimens collected in Japan. BMC Infect Dis, 2023; 23: 418. – reference: 9) Kuramitsu M et al.: Proviral features of human T cell leukemia virus type l in carriers with indeterminate Western blot analysis results. J Clin Microbiol, 2017; 55: 2838–2849. – reference: 11) Watanabe M et al.: Dual targeting of transformed and untransformed HTLV-1-infected T cells by DHMEQ, a potent and selective inhibitor of NF-kappaB, as a strategy for chemoprevention and therapy of adult T-cell leukemia. Blood, 2005; 106: 2462–2471. – reference: 3) Satake M et al.: Current prevalence of HTLV-1 in Japan as determined by screening of blood donors. J Med Virol, 2012; 84: 327–335. – reference: 14) Yamauchi J et al.: Risk of human T-cell leukemia virus type 1 infection in kidney transplantation. N Engl J Med, 2019; 380: 296–298. – reference: 22) Kuramitsu M et al.: Development of reference material with assigned value for human T-cell leukemia virus type 1 quantitative PCR in Japan. Microbiology and Immunology, 2018; 62: 673–676. – reference: 7) Glowacka I et al.: Delayed seroconversion and rapid onset of lymphoproliferative disease after transmission of human T-cell lymphotropic virus type l from a multiorgan donor. Clin Infect Dis, 2013; 57: 1417–1424. – reference: 18) Kenneth G et al.: Delineation of an immunodominant and human T-cell lymphotropic virus (HTLV)-specific epitope within the HTLV-I transmembrane glycoprotein. Blood, 1995; 86: 1392–1399. – reference: 20) Sagara Y et al.: Estimation of the window period of human T-cell leukemia virus type 1 and 2 tests by a lookback study of seroconverters among Japanese voluntary blood donors. Transfusion, 2021; 61: 484–493. |
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| SubjectTerms | ヒトT細胞白血病ウイルスI型 ラインブロット法 化学発光酵素免疫測定法 定量リアルタイムPCR 腎臓移植 |
| Title | Real-time PCRを用いたHTLV-1遺伝子定量法の確立 |
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