E型肝炎ウイルスの遺伝子型3および4型株迅速鑑別のためのマルチプレックスreal-time RT-PCR法における検出試薬の比較検討

• Published in: 医学検査 Vol. 70; no. 4; pp. 740 - 747
• Main Authors: 飯田, 樹里, 生田, 克哉, 佐藤, 進一郎, 松林, 圭二, 坂田, 秀勝, 紀野, 修一, 小林, 悠
• Format: Journal Article
• Language: Japanese
• Published: 一般社団法人 日本臨床衛生検査技師会 25.10.2021; 日本臨床衛生検査技師会
• Subjects: E型肝炎ウイルス; PCR効率; マルチプレックスreal-time RT-PCR; 検出感度; 遺伝子型
• ISSN: 0915-8669; 2188-5346
• DOI: 10.14932/jamt.21-40

E型肝炎ウイルス（HEV）はE型肝炎の原因ウイルスであり，本邦では遺伝子型3型と4型が検出されている。北海道では高病原性である4型が他地域よりも高率に検出されるため，われわれは3型と4型を迅速に鑑別可能なマルチプレックスreal-time RT-PCR法（鑑別PCR）を開発した。今回，遺伝子型およびHEV RNA濃度既知の献血者由来検体を対象に，リアルタイムPCR試薬であるQuantiTect Probe RT-PCR Kit（従来試薬）およびReliance One-step Multiplex RT-qPCR Supermix（BIO-RAD，A試薬）を用いて，鑑別PCRにおいて感度などに変化があるかを検討した。各遺伝子型のリニアダイナミックレンジは，3型に対しては同等で，4型に対してはA試薬が従来試薬よりも線形区間が10倍広範囲であった。PCR効率は，3型で109.9% vs. 108.3%，4型で89.7% vs. 97.1%であり，血漿1,000 μL使用時の検出感度は，3型で20 IU/mL vs. 19 IU/mL，4型で66 IU/mL vs. 16 IU/mLであった（いずれも従来試薬vs. A試薬）。A試薬により4型に対するPCR効率および検出感度は向上し，高病原性である4型の感染者において遺伝子型情報をより早期に提供可能であり，その後の治療に有用と考えられた。