大過剰のカルボキシメチル化カードランによるG因子系阻害作用を利用したエンドトキシン特異的リムルステストの開発とその応用
カブトガニ血球抽出物(LAL)を用いたリムルステストにおいて,大過剰のカルボキシメチル化カードラン(CM-カードラン)を反応系に共存させることによつてβ-グルカン自身によるLALの活性化を阻害し,エンドトキシンを特異的に検出する方法を開発した。 LALの反応液に0.1mg/ml以上のCM-カードランを添加した場合,CM-カードラン自身によるLALの活性化は完全に阻害されたが,エンドトキシンの測定は影響を受けなかつた。1mg/mlのCM-カードランを含むLALの測定系を構成したところ,一般に用いられているリムルステストの手法であるゲル化転倒法,比濁時間分析法,合成基質法のすべてでβ-グルカンの影...
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| Published in | 日本細菌学雑誌 Vol. 45; no. 6; pp. 903 - 911 |
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| Main Authors | , , , |
| Format | Journal Article |
| Language | Japanese |
| Published |
日本細菌学会
01.11.1990
|
| Online Access | Get full text |
| ISSN | 0021-4930 1882-4110 |
| DOI | 10.3412/jsb.45.903 |
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| Abstract | カブトガニ血球抽出物(LAL)を用いたリムルステストにおいて,大過剰のカルボキシメチル化カードラン(CM-カードラン)を反応系に共存させることによつてβ-グルカン自身によるLALの活性化を阻害し,エンドトキシンを特異的に検出する方法を開発した。 LALの反応液に0.1mg/ml以上のCM-カードランを添加した場合,CM-カードラン自身によるLALの活性化は完全に阻害されたが,エンドトキシンの測定は影響を受けなかつた。1mg/mlのCM-カードランを含むLALの測定系を構成したところ,一般に用いられているリムルステストの手法であるゲル化転倒法,比濁時間分析法,合成基質法のすべてでβ-グルカンの影響を受けないエンドトキシンの測定が可能であつた。また,この測定系を用いてグラム陰性菌を特異的に検出できる可能性も示唆された。この方法は,試薬の調製が非常に簡便であり,従来通りの操作法でエンドトキシンに特異的なリムルステストが行えることから,薬剤のエンドトキシン試験のみならず,臨床分野でも有用と考える。 |
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| AbstractList | カブトガニ血球抽出物(LAL)を用いたリムルステストにおいて,大過剰のカルボキシメチル化カードラン(CM-カードラン)を反応系に共存させることによつてβ-グルカン自身によるLALの活性化を阻害し,エンドトキシンを特異的に検出する方法を開発した。 LALの反応液に0.1mg/ml以上のCM-カードランを添加した場合,CM-カードラン自身によるLALの活性化は完全に阻害されたが,エンドトキシンの測定は影響を受けなかつた。1mg/mlのCM-カードランを含むLALの測定系を構成したところ,一般に用いられているリムルステストの手法であるゲル化転倒法,比濁時間分析法,合成基質法のすべてでβ-グルカンの影響を受けないエンドトキシンの測定が可能であつた。また,この測定系を用いてグラム陰性菌を特異的に検出できる可能性も示唆された。この方法は,試薬の調製が非常に簡便であり,従来通りの操作法でエンドトキシンに特異的なリムルステストが行えることから,薬剤のエンドトキシン試験のみならず,臨床分野でも有用と考える。 |
| Author | 松浦, 脩治 高岡, 文 土谷, 正和 時岡, 伸行 |
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| References | 4) Jorgensen, J.H. (1986): Clinical applications of the Limulus amebocyte lysate test. 127-160, In Proctor, R.A. (ed.), Handbook of Endotoxin, Elsevier, Amsterdam. 9) Morita, T., Tanaka, S., Nakamura, T., and Iwanaga, S. (1981): A new (1→3)-β-D-glucan coagulation pathway found in Limulus amebocytes. FEBS Lett., 129, 318-321. 14) 大石晴樹,畑山泰道,白石浩己,柳沢和也,佐方由嗣(1985):並列比濁時間分析法によるエンドトキシンの自動測定.薬学雑誌, 105, 300-303. 16) Oishi, H., Fusamoto, M., Hatayama, Y., Tsuchiya, M., Takaoka, A., and Sakata, Y. (1988): An automated analysis system of Limulus amebocyte lysate (LAL)-Endotoxin reaction kinetics using turbidimetric kinetic assay. Chem. Pharm. Bull., 36, 3012-3019. 17) Sasaki, T., Abiko, N., Nitta, K., Takasuka, N., and Sugino, Y. (1979): Antitumor activity of carboxymethylglucans obtained by carboxymethylation of (1→3)-β-D-glucan from Alcaligenes faecalis var. myxogenes IFO 13140. Europ. J. Cancer, 15, 211-215. 10) Nakamura, S., Morita, T., Iwanaga, S., Niwa, M., and Takahashi, K. (1977): A sensitive substrate for the clotting enzyme in horseshoe crab hemocytes. J. Biochem., 81, 1567-1569. 6) Jorgensen, J.H. and Reichler, A.S. (1982): Automation of Limulus amebocyte lysate pyrogen testing. J. Parenter. Sci. Technol., 36, 96-98. 20) Tsuchiya, M., Oishi, H., Takaoka, A., Fusamoto, M., and Matsuura, S.: Discrimination between endotoxin and (1→3)-β-D-glucan using turbidimetric kinetic assay with Limulus amebocyte lysate. Chem. Pharm. Bull. (in press 15) Oishi, H., Takaoka, A., Hatayama, Y., Matsuo, T., and Sakata, Y. (1985): Automated Limulus amebocyte lysate (LAL) test for endotoxin analysis using a new Toxinometer ET-201. J. Parenter. Sci. Technol., 39, 194-200. 1) 第十一改正日本薬局方追補(1988):エンドトキシン試験法. B-11. 11) 中村隆範,森田隆司,平永万寿代,宮田敏行,岩永貞明(1983):細菌内毒素によるカブトガニ血球細胞の活性化とその分子機構.日細菌誌,38, 781-803. 12) Novitsky, T.J., Remillard, J.F., and Loy, N. (1987): Design criteria and evaluation of the LAL-4000 for kinetic turbidimetric LAL assay. 189-196, In Watson, S.W., Levin, J., and Novitsky, T.J. (Eds.), Detection of Bacterial Endotoxins With the Limulus Amebocyte Lysate Test, Alan R. Liss Inc., New York. 2) Hodes, D.S., Heon, D., Hass, A., Hyatt, A.C., and Hodes, H.L. (1987): Reaction of fungal products with amebocyte lysates of the Japanese horseshoe crab, Tachypleus tridentatus. J. Clin. Microbiol., 25, 1701-1704. 8) Levin, J. and Bang, F.B. (1964): The role of endotoxin in the extracellular coagulation of Limulus blood. Bull. Johns Hopkins Hosp. 115, 265-274. 5) Jorgensen, J.H. and Alexander, G.A. (1981): Automation of the Limulus amebocyte lysate test by using the Abbott MS-2 microbiology system. Appl. Environ. Microbiol., 41, 1316-1320. 18) The United States Pharmacopeia 22th, The National Formulary 17th (1989): Bacterial Endotoxins Test. 1493-1495, Pharmacopeial Convention Inc., MD. 7) Kakinuma, A., Asano, T., Torii, H., and Sugino, Y. (1981): Gelation of Limulus amebocyte lysate by an antitumor (1→3)-β-D-glucan. Biochem. Biophys. Res. Commun., 101, 434-439. 19) 土谷正和,高岡文,房本正滋,大石晴樹,松浦脩治(1988):比濁時間分析装置を用いたエンドトキシンとβ-1, 3-グルカンの判別と同時定量の試み.日本薬学会第108年会講演要旨集, 162. 13) Obayashi, T., Tamura, H., Tanaka, S., Ohki, M., Takahashi, S., Arai, M., Masuda, M., and Kawai, T. (1985): A new chromogenic endotoxin-specific assay using recombined Limulus coagulation enzymes and its clinical applications. Clin. Chim. Acta, 149, 55-65. 3) Iwanaga, S., Morita, T., Harada, T., Nakamura, S., Niwa, M., Takada, K., Kimura, T., and Sakakibara, S. (1978): Chromogenic substrates for horseshoe crab clotting enzyme; Its application for the assay of bacterial endotoxins. Haemostasis, 7, 183-188. |
| References_xml | – reference: 9) Morita, T., Tanaka, S., Nakamura, T., and Iwanaga, S. (1981): A new (1→3)-β-D-glucan coagulation pathway found in Limulus amebocytes. FEBS Lett., 129, 318-321. – reference: 11) 中村隆範,森田隆司,平永万寿代,宮田敏行,岩永貞明(1983):細菌内毒素によるカブトガニ血球細胞の活性化とその分子機構.日細菌誌,38, 781-803. – reference: 20) Tsuchiya, M., Oishi, H., Takaoka, A., Fusamoto, M., and Matsuura, S.: Discrimination between endotoxin and (1→3)-β-D-glucan using turbidimetric kinetic assay with Limulus amebocyte lysate. Chem. Pharm. Bull. (in press) – reference: 3) Iwanaga, S., Morita, T., Harada, T., Nakamura, S., Niwa, M., Takada, K., Kimura, T., and Sakakibara, S. (1978): Chromogenic substrates for horseshoe crab clotting enzyme; Its application for the assay of bacterial endotoxins. Haemostasis, 7, 183-188. – reference: 10) Nakamura, S., Morita, T., Iwanaga, S., Niwa, M., and Takahashi, K. (1977): A sensitive substrate for the clotting enzyme in horseshoe crab hemocytes. J. Biochem., 81, 1567-1569. – reference: 6) Jorgensen, J.H. and Reichler, A.S. (1982): Automation of Limulus amebocyte lysate pyrogen testing. J. Parenter. Sci. Technol., 36, 96-98. – reference: 14) 大石晴樹,畑山泰道,白石浩己,柳沢和也,佐方由嗣(1985):並列比濁時間分析法によるエンドトキシンの自動測定.薬学雑誌, 105, 300-303. – reference: 16) Oishi, H., Fusamoto, M., Hatayama, Y., Tsuchiya, M., Takaoka, A., and Sakata, Y. (1988): An automated analysis system of Limulus amebocyte lysate (LAL)-Endotoxin reaction kinetics using turbidimetric kinetic assay. Chem. Pharm. Bull., 36, 3012-3019. – reference: 1) 第十一改正日本薬局方追補(1988):エンドトキシン試験法. B-11. – reference: 4) Jorgensen, J.H. (1986): Clinical applications of the Limulus amebocyte lysate test. 127-160, In Proctor, R.A. (ed.), Handbook of Endotoxin, Elsevier, Amsterdam. – reference: 13) Obayashi, T., Tamura, H., Tanaka, S., Ohki, M., Takahashi, S., Arai, M., Masuda, M., and Kawai, T. (1985): A new chromogenic endotoxin-specific assay using recombined Limulus coagulation enzymes and its clinical applications. Clin. Chim. Acta, 149, 55-65. – reference: 8) Levin, J. and Bang, F.B. (1964): The role of endotoxin in the extracellular coagulation of Limulus blood. Bull. Johns Hopkins Hosp. 115, 265-274. – reference: 15) Oishi, H., Takaoka, A., Hatayama, Y., Matsuo, T., and Sakata, Y. (1985): Automated Limulus amebocyte lysate (LAL) test for endotoxin analysis using a new Toxinometer ET-201. J. Parenter. Sci. Technol., 39, 194-200. – reference: 18) The United States Pharmacopeia 22th, The National Formulary 17th (1989): Bacterial Endotoxins Test. 1493-1495, Pharmacopeial Convention Inc., MD. – reference: 2) Hodes, D.S., Heon, D., Hass, A., Hyatt, A.C., and Hodes, H.L. (1987): Reaction of fungal products with amebocyte lysates of the Japanese horseshoe crab, Tachypleus tridentatus. J. Clin. Microbiol., 25, 1701-1704. – reference: 5) Jorgensen, J.H. and Alexander, G.A. (1981): Automation of the Limulus amebocyte lysate test by using the Abbott MS-2 microbiology system. Appl. Environ. Microbiol., 41, 1316-1320. – reference: 7) Kakinuma, A., Asano, T., Torii, H., and Sugino, Y. (1981): Gelation of Limulus amebocyte lysate by an antitumor (1→3)-β-D-glucan. Biochem. Biophys. Res. Commun., 101, 434-439. – reference: 19) 土谷正和,高岡文,房本正滋,大石晴樹,松浦脩治(1988):比濁時間分析装置を用いたエンドトキシンとβ-1, 3-グルカンの判別と同時定量の試み.日本薬学会第108年会講演要旨集, 162. – reference: 12) Novitsky, T.J., Remillard, J.F., and Loy, N. (1987): Design criteria and evaluation of the LAL-4000 for kinetic turbidimetric LAL assay. 189-196, In Watson, S.W., Levin, J., and Novitsky, T.J. (Eds.), Detection of Bacterial Endotoxins With the Limulus Amebocyte Lysate Test, Alan R. Liss Inc., New York. – reference: 17) Sasaki, T., Abiko, N., Nitta, K., Takasuka, N., and Sugino, Y. (1979): Antitumor activity of carboxymethylglucans obtained by carboxymethylation of (1→3)-β-D-glucan from Alcaligenes faecalis var. myxogenes IFO 13140. Europ. J. Cancer, 15, 211-215. |
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| Title | 大過剰のカルボキシメチル化カードランによるG因子系阻害作用を利用したエンドトキシン特異的リムルステストの開発とその応用 |
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| ispartofPNX | 日本細菌学雑誌, 1990/11/25, Vol.45(6), pp.903-911 |
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