毒死蜱单克隆抗体制备及icELISA检测方法优化 - 王伟华 田木星 韩占江 (食品安全质量检测学报, 2014)
目的：制备毒死蜱单克隆抗体,建立 icELISA(间接竞争酶联免疫吸附方法)检测方法并对其进行优化。方法以毒死蜱为基础物质,制备半抗原CPF-H1和CPF-H2,偶联蛋白制备人工抗原,进而通过免疫、细胞融合、筛选得到特异性的单克隆抗体,建立毒死蜱的icELISA检测方法,并对其分析条件进行优化。结果质谱鉴定结果表明毒死蜱半抗原制备成功；半抗原偶联蛋白,紫外全波长扫描鉴定人工抗原制备成功；免疫动物、细胞融合并制备单克隆抗体；建立了icELISA检测方法,优化得到最佳反应条件： PBST为标准品稀释液,包被抗原最佳稀释倍数为1：1000,抗体最佳稀释倍数为1：1000,一抗反应最佳时间为40 min,二抗反应最佳时间为30 min,制得毒死蜱标准曲线,毒死蜱对抗体的 IC50为73.25 ng/mL,线性范围 IC20～IC80为32.52～260 ng/mL, LOD为19.34 ng/mL。结论本研究为毒死蜱快速检测技术奠定了理论基础,对保障人们的身体健康具有重要的意义。