结缔组织生长因子特异性小分子干扰RNA的筛选及其在抗肝纤维化中的作用

• Published in: 浙江大学学报（医学版） Vol. 40; no. 6; pp. 603 - 608
• Main Authors: 毛小荣, 岳伟, 袁宏, 陈红, 薛苗
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 兰州大学第一医院传染科,甘肃兰州,730000 2011
• Subjects: 小分子干扰RNA; RNA,小分子干扰/药理学; 肝硬化/病理学; 结缔组织生长因子; 肝纤维化; 胞间信号肽类和蛋白质类/生物合成; 疾病模型,动物
• ISSN: 1008-9292
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2011.06.006

R575.2; 目的:设计和合成针对抗肝纤维化关键基因结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的特异性小干扰RNA( siRNA),并筛选高效的CTGFsiRNA抗肝纤维化序列,探讨其通过尾静脉注射是否具有抗大鼠肝纤维化作用.方法:①筛选高效的CTGF siRNA序列.②干预肝纤维化模型大鼠.选取雄性SD大鼠30只,随机分成5组,分别为空白对照组尾静脉注射生理盐水8周；模型组腹腔注射40％ CCl4(3 ml/kg)及尾静脉注射生理盐水,1次/3d,连续8周；预防组腹腔注射40％ CCl4及尾静脉注射CTGF siRNA(0.1 mg/kg),1次/3d,连续8周；2周治疗组腹腔注射40％ CCl4 2周,后给予CTGF siRNA及CCl4 6周；4周治疗组腹腔注射40％ CCl4 4周,后给予CTGFsiRNA及CCl4 4周.于最后一次CC14注射3天后取血及组织标本,检测肝纤维化指标,应用Real-Time PCR及Western印迹法检测CTGF mRNA及蛋白质在大鼠肝组织表达,应用Masson染色检测肝组织纤维化.结果:与模型组(0.544±0.019)相比,预防组(0.105±0.003)及治疗组(0.190±0.006)大鼠肝组织CTGF mRNA和蛋白质表达显著下调(P＜0.05),肝组织炎症和坏死及纤维化明显减轻,肝纤维化指标显著降低(P＜0.05).4周治疗组与模型组相比各指标降低,与预防组及2周治疗组相比各指标相对升高(P＜0.05).结论:成功筛选出高效的CTGF siRNA,且经尾静脉注射CTGF siRNA能显著抑制大鼠体内肝脏CTGF基因表达,并能有效防治大鼠肝纤维化,对于病程较长的肝纤维化也有一定的治疗作用,提示CTGF siRNA在抗肝纤维化治疗中有重要作用.