大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

Q256%Q421; 目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究.方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD_4处理后细胞内钙变化.结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体...

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Published in浙江大学学报（医学版） Vol. 38; no. 6; pp. 584 - 590
Main Authors 林卡娜, 方三华, 蔡蓓蕾, 王欣欣, 卢韵碧, 张纬萍, 魏尔清
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 浙江大学医学院药理学系,浙江,杭州,310058 2009
Subjects
GPR17
半胱氨酸/遗传
白三烯/遗传
细胞内钙
HEK293 cell
Intracellular calcium
遗传载体
真核表达载体
Receptors
Eukaryotic expression vector
Genetic vectors
受体
Cysteine/genet
leukotriene/genet
HEK293细胞
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ISSN1008-9292
DOI10.3785/j.issn.1008-9292.2009.06.006

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Summary:Q256%Q421; 目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究.方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD_4处理后细胞内钙变化.结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD_4可诱导细胞内钙的增加.结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础.
ISSN:1008-9292
DOI:10.3785/j.issn.1008-9292.2009.06.006