大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及GFP转染标记

• Published in: Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban Vol. 26; no. 5; pp. 431 - 434
• Main Author: 王亭忠 马爱群 蒋文慧 徐正云 席雨涛
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 西安交通大学第一医院心内科,教育部环境与疾病相关基因重点实验室,陕西西安710061 2005
• Subjects: 培养; 大鼠; 绿色荧光蛋白; 转染; 骨髓间充质干细胞; 培养; 骨髓间充质干细胞; 大鼠; 绿色荧光蛋白; 转染
• ISSN: 1671-8259
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2005.05.007

目的 建立大鼠骨髓间充质于细胞（MSCs）的分离和培养方法，检测绿色荧光蛋白基因转染MSCs的瞬时表达及转染效率。方法 应用Percoll密度梯度离心法分离大鼠MSCs，贴壁法不断纯化，流式细胞仪检测2代细胞表面CD34、CD71和CD90的表达，然后用pEGFP-N3与Lipofectamine2000不同浓度比例转染MSCs，荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率。结果 ①原代MSCs多呈纺锤形或梭形，有聚集生长的倾向，多3～5个细胞成为一个集落。传代后，细胞变为形态均一的排列有序的成纤维细胞样，长梭形，胞浆突起较少，胞体轮廓不甚清晰，胞体也相对较大；②GFP转染后24h即可见绿色荧光蛋白表达，72h表达最强，此后逐渐减弱，到4周时仍可见少量表达；③转染效率与质粒和脂质体的浓度比例有关，1：2到1：3最高。结论 利用Percoll密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs；GFP转染是一种较好的MSCs标记方法。