重组人细胞角蛋白9 cDNA的原核表达及纯化 - 王博 周艳 侯卫坤 蔡永松 张英 王林玉 韩燕 孟列素 (西安交通大学学报（医学版）, 2017)
目的 克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法 从人角质形成细胞系（HaCaT）中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达。表达的融合蛋白通过Ni 2＋亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果 测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合。结论 成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9。