荧光实时定量PCR检测NSCLC中PEDF基因表达状态的研究 - 张力建 陈晋峰 柯杨 Robert E Mansel Wen G Jiang (Zhongguo fei ai za zhi, 2006)
背量与目的SYBR GreenⅠ是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法，其主要优点在于操作过程简单，结果具有一定特异性。本研究的目的是建立检测色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR的方法，了解肺癌组织及其远癌肺组织中PEDF的表达水平，研究肺癌组织中PEDF的表达水平与各种临床病理特征之间的关系。方法利用RT-PCR的方法扩增并纯化PEDF以及内对照GAPDH mRNA的目的片段，倍比稀释后作为定量模板。利用相对定量的方法，检测21例肺癌及相应远癌肺组织中PEDF mRNA相对于GAPDH mRNA的表达量，进行相对定量分析。结果21例肺癌组织及相应的远癌肺组织中均可检出PEDF的表达，肺癌组织中PEDF的相对表达量为0．5505±0．3590（0．11～1．11），远癌肺组织中为0．7219±0．2582（0．29～1．31）（P=0．024）。早期（Ⅰ～Ⅱ期）肺癌患者和肿瘤较小时（T1）PEDF的表达量显著高于晚期（Ⅲ～Ⅳ期，P=0．010）和肿瘤较大者（T2-4，P=0．007）。结论所建立的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法可以成功地检测PEDF基因的表达量。初步检测结果显示PEDF可能是一种肺癌发生发展过程中的保护因素。