核盘菌交配型基因MAT-2的克隆,序列分析及原核表达 - 陈婷婷 孙庚 刘金亮 孙明洋 胡瑞学 张世宏 潘洪玉 (Xinan nongye xuebao, 2011)
核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）有性生殖决定着菌核病的初侵染及流行程度,有性生殖过程中的交配型基因对该菌的性别控制和遗传进化起着决定性作用,为揭示核盘菌有性生殖的分子机制,本研究对核盘菌的交配型基因MAT-2进行了克隆、序列分析及其原核表达的研究。根据GenBank中核盘菌MAT-2基因（DQ159959）序列设计引物,提取该菌总RNA,采用Reverse Transcription-PCR（RT-PCR）的方法扩增交配型基因MAT-2,对其进行序列分析,构建其原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21中进行原核表达。以反转录产物为模板,扩增出1185 bp的MAT-2基因片段（命名为MAT-2-JL）,通过测序及序列分析,结果表明,与GenBank中不同真菌的交配型基因核苷酸序列的同源性为26.6%～98.8%,推导的氨基酸序列同源性为12.0%～98.8%。根据完整的MAT-2基因核苷酸序列构建的系统进化树显示：不同菌株的24个交配型基因可分为2组,其中MAT-2-JL与黄色镰孢菌（Fusarium culmorum）和藤仓赤霉菌（Gibberella fujikuroi）MAT-2等属于组Ⅰ。将MAT-2-JL基因与原核表达载体pET28a连接,在大肠杆菌BL21中诱导表达出分子量约48.2 kD的融合蛋白。