过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应 - 朱晓丹 王颖 毕晶 童琳 刘洁 宋元林 白春学 (中国临床医学, 2016)
目的：通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法：构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）,筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖（LPS,1μg/mL）进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子（TNF-α、IL-1β）及核因子κB（NF-κB）活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果：LPS刺激后,A20过表达组（A20组）及正常对照组（VEC组）A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高（P〈0.05）。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子（TNF-α、IL-1β）水平明显降低（P〈0.05）;NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低（P〈0.05）。结论：A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。