过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

目的：通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法：构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）,筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖（LPS,1μg/mL）进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子（TNF-α、IL-1β）及核因子κB（NF-κB）活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果：LPS刺激后,A20过表达组（A20组）及正常对照组（VEC组）A20蛋白及mRNA含量...

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Published in中国临床医学 Vol. 23; no. 6; pp. 715 - 719
Main Author 朱晓丹 王颖 毕晶 童琳 刘洁 宋元林 白春学
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 复旦大学附属中山医院呼吸内科,上海,200032 2016
Subjects
A20蛋白
巨噬细胞
急性呼吸窘迫综合征
炎症反应
肺泡
急性呼吸窘迫综合征
肺泡
巨噬细胞
acute respiratory distress syndrome
inflammatory response
macrophage
A20 protein
alveolar
A20蛋白
炎症反应
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ISSN1008-6358
DOI10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160822

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Summary:目的：通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法：构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）,筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖（LPS,1μg/mL）进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子（TNF-α、IL-1β）及核因子κB（NF-κB）活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果：LPS刺激后,A20过表达组（A20组）及正常对照组（VEC组）A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高（P〈0.05）。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子（TNF-α、IL-1β）水平明显降低（P〈0.05）;NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低（P〈0.05）。结论：A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。
Bibliography:31-1794/R
acute resp iratory d istress syndrom e； A 20 p ro tein； alv eolar； m acrop hage； inflam m atory response
ZHU Xiao-dan, WANG Ying, BI Jing, TONG Lin, LIU Jie , SONG Yuan-lin, BAI Clum-xue（D epartm ent of R esp iratory M edicine, Zhongshan H o sp ital, Fudan U n iv ersity , Shanghai 2 0 0 0 3 2 , China）
Objective ： T o study th e effects of A 20 on the inflam m atory response of alveolar m acrophages and itsregulation m echanism through establish ing A 20 ov er-exp ressing alveolar m acrophage cell lines. Methods ： Lentivirus-m ediatedexp ression v ector carrying A 20 gene was con stru cted , then it was transfected into ra t alveolar m acrophage cell lines （ N R 8 3 8 3 ） ,and th e cell lines w hich stably overexpressed A 20 gene w ere screened and cultured in v itr o . L ipopolysaccharide （ L P S , 1 y.g /m L ） w as added into the medium to interven e, th e culture supernatants and cells w ere collected 0. 5 ,1 ,2 , 4 hours afterstim u lation , E L IS A m ethod w as used to determ ine the activity of c
ISSN:1008-6358
DOI:10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160822