利用PMI选择标记进行杨树转基因体系的研究 - 查琳 王伟东 续晨 诸葛强 (林业科学研究, 2016)
[目的]利用不同于抗生素的PMI为选择标记基因的遗传转化体系,对杨树进行双抗虫基因（Bt和Cp TI）的转基因研究。建立杨树以PMI为安全标记基因的转基因体系,为安全、高效的林木转基因育种研究提供实验依据。[方法]选择已有的转Cp TI抗虫基因（利用Kmr选择标记获得）的美洲黑杨杂种优良无性系南林895杨（Populus×euramericana‘Nanlin895’）为受体材料,对杨树叶片、叶片分化芽、茎段生根的甘露糖敏感性等筛选优化,采用农杆菌介导的方法进行双抗虫基因的研究。[结果]较为适合的杨树叶片筛选培养基为：甘露糖8 g·L^-1和蔗糖22 g·L^-1;叶片分化芽筛选培养基为：甘露糖10 g·L^-1和蔗糖20 g·L^-1;茎段生根筛选培养基：甘露糖8 g·L^-1和蔗糖22 g·L^-1。在此基础上,获得了转Bt和Cp TI双抗虫基因的植株8株。[结论]初步建立了以PMI为安全标记基因的杨树转基因体系：确定了PMI筛选的最适选择压,成功构建了含PMI选择标记基因的植物抗虫表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化最终获得了转双抗虫基因植株。