miR-196b海绵吸附慢病毒载体的构建及其在骨髓基质细胞系ST2中的表达 - 杨威利;王珊;王宝利;李晓霞 (天津医药, 2017)
目的构建miR-196b海绵吸附慢病毒载体，为研究miR-196b在骨髓基质细胞系中的功能奠定基础。方法根据miR-196b的成熟体序列设计与之互补的串联的六重复序列设计成引物，通过PCR反应将该六重复序列亚克隆至pUC19质粒中，再经酶切连接至pLVX-shRNA2慢病毒载体，利用293T细胞将构建成功的miR-196b海绵吸附慢病毒载体进行病毒包装和滴度测定，pLVX-shRNA2慢病毒作为对照组，miR-196b海绵吸附慢病毒作为实验组，将其感染ST2细胞，观察感染效率，并通过Westernblotting检测miR-196b靶基因叉头框蛋白O1（FoxO1）的蛋白水平。结果酶切鉴定和测序结果正确，慢病毒包装所测滴度为1×108PFU/mL，将其感染靶细胞，其感染效率达80%。Westernblotting结果显示，与对照组相比，其靶基因FoxO1蛋白表达水平有明显增加（P<0.05）。结论成功构建了miR-196b海绵吸附慢病毒载体，并能有效吸附内源性的miR-196b，从而发挥其抑制作用。