Rad9错配修复功能缺陷与结直肠癌发生的关系

目的探讨Rad9错配修复功能与结直肠癌发生的关系。方法收集100例结直肠癌患者肿瘤样本，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hRad9基因突变，采用快速点突变方法构建hRad9L101M点突变质粒并转染Rad9基因敲除的小鼠细胞。采用Westernblot方法检测Rad9表达．采用错配修复报告质粒及流式细胞仪检测活细胞错配修复能力。结果100例结直肠癌患者中，有7例发现了hRad9基因101位氨基酸由亮氨酸突变为甲硫氨酸。mRad9-＋L101M细胞（表达hRad9．L101M突变体的Rad9基因敲除小鼠细胞）和mRad9＋hRad9细胞（表达hRad9的Rad9基因敲除小鼠细胞）的错配...

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Published in中华肿瘤杂志 Vol. 38; no. 5; pp. 351 - 356
Main Author 孔曼 安莉莉 胡志上 李凯敏 赵云 蔡泽远 孙继亚 王海凤 张树才 张振亚
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 101149首都医科大学附属北京潞河医院肿瘤科%中国科学院生物物理研究所蛋白质与多肽药物所重点实验室, 北京,100101%中国计量科学研究院 化学计量与分析科学研究所, 北京,100029%072750,河北省保定市第二中心医院普外科%215123,苏州系统医学研究所%河北联合大学生命科学学院, 唐山,063000%首都医科大学附属胸科医院肿瘤科, 北京,101149%河北医科大学第四医院外二科, 石家庄,050011 2016
Subjects
DNA错配修复
hRad9
点突变
结直肠肿瘤
结直肠肿瘤
Subject words] Colorectal neoplasms
点突变
hRad9
DNA错配修复
DNA mismatch repair
Point mutation Fund program:National Natural Science Foundation of China ( 11179040,31400041)
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ISSN0253-3766
DOI10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2016.05.006

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Summary:目的探讨Rad9错配修复功能与结直肠癌发生的关系。方法收集100例结直肠癌患者肿瘤样本，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hRad9基因突变，采用快速点突变方法构建hRad9L101M点突变质粒并转染Rad9基因敲除的小鼠细胞。采用Westernblot方法检测Rad9表达．采用错配修复报告质粒及流式细胞仪检测活细胞错配修复能力。结果100例结直肠癌患者中，有7例发现了hRad9基因101位氨基酸由亮氨酸突变为甲硫氨酸。mRad9-＋L101M细胞（表达hRad9．L101M突变体的Rad9基因敲除小鼠细胞）和mRad9＋hRad9细胞（表达hRad9的Rad9基因敲除小鼠细胞）的错配修复效率分别为（34．0±5．6）％和（48．0±7．5）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。用N-甲基亚硝脲（MNU）处理细胞后，mRad9-＋L101M细胞和mRad9-＋hRad9细胞的存活率分别为（33．7±5．9）％和（21.3±4．7）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。hRad9基因101位氨基酸突变导致细胞错配修复效率下降及对MNU的抗性增加。hRad9基因多处翻译后修饰位点突变导致细胞错配修复能力下降。结论hRad9错配修复功能缺陷可能与结直肠癌发生有关。
Bibliography:Objective The aim of this study was to investigate the effects of Rad9 mutants with impaired DNA mismatch repair （MMR） function on the tumorigenesis of colorectal cancer. Methods The eoloreetal cancer tumor samples were collected from 100 patients. The mutation profiles of human Rad9 （hRadg） gene in these samples were detected by reverse transeriptase-polymerase chain reaction （RT-PCR） and sequencing. The plasmid of pFLAG-hRad9 （L101M） was constructed following the QuickChangemutagenesis procedure and transfected into mRad9-deleted mouse cells （mRad9-z- cells）. The expression of hRad9 protein was measured by western blot analysis. The MMR activity in live cells was detected by flow cytometry using the reporter plasmid for MMR function. Results Mutation from Leu to Met at the residue 101 （L101M） of hRad9 gene was detected in 7 of the 100 samples. The mismatch repair efficiency of mRad9-/- L 101 M cells （ mRad9-deleted mouse cells with ectopic expression of LIO 1M hRad9 gene ） was （34.0±5.6） %, which was signif
ISSN:0253-3766
DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2016.05.006