PGC-1α辅助激活人PEPCK基因转录 (Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban, 2011)
【目的】构建人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子荧光素酶报告质粒PGL3-hPCK-luc，并探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)在转录因子肝细胞核因子4α(HNF4α)介导下对人PEPCK基因启动子活性的影响【方法】从人全血基因组DNA中克隆PEPCK启动子基因片段，并重组进荧光素酶报告载体PGL3-basic，将pcDNA3.1-PGC-1αpcDNA3.0-HNF4α表达质粒与PGL3-hPCK-luc按不同组合共转染进人肝癌细胞株HepG2细胞或正常人肝细胞株LO2细胞,培养48 h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性【结果】通过酶切鉴定及测序证明扩增的人PEPCK启动子片段成功插入载体质粒中转染后人PEPCK启动子基因荧光素酶活性较空白对照组增加60倍(P < 0.05)；共转染质粒进HepG2细胞或LO2细胞后，HNF4α均可以增强人PEPCK启动子基因荧光素酶活性，在HepG2细胞，荧光素酶活性是对照组的2.69倍(P < 0.05)，而在LO2细胞中，荧光素酶活性是对照组的3.64倍(P < 0.05)；PGC-1α可以明显增强HNF4α对人PEPCK启动子的激活作用，在HepG2细胞，荧光素酶活性是PGL3-HPCK-luc+HNF4α组的2.01倍(P < 0.05)，而在LO2细胞中,荧光素酶活性是PGL3-HPCK-luc+HNF4α组的2.82倍(P < 0.05)而与单一转染组相比，共转染pcDNA3.1-PGC-1α与pcDNA3.0-HNF4α显著增加了PEPCK的mRNA和蛋白表达水平(P < 0.05)【结论】人PEPCK启动子基因报告质粒成功构建，且转录因子HNF4α可以激活人PEPCK启动子活性，辅助激活因子PGC-1α可以进一步加强HNF4α的作用