牛乳, 乳製品に含まれるカルニチンの分画定量法 - 浜本, 典男; 下田, 幸三; 松浦, 弘明; 松浦, 法夫 (Nihon Eiyō, Shokuryō Gakkai shi, 1988)
牛乳, 乳製品を対象に, Cの分画, アルカリ加水分解の条件ならびに放射能測定用の反応液組成など, Cの分画定量条件を検討した。 1) 分画に用いる過塩素酸溶液は, 2～6%濃度のいずれによっても, 酸可溶性-C, 酸不溶性-Cの測定値に差を生じなかったが, 清澄な遠心上清がえられる6%濃度 (最終濃度3%) を採用した。 2) 6%過塩素酸溶液 (最終濃度3%) で分画した酸可溶性画分には, 主として炭素数10以下の短鎖結合型-Cが, 酸不溶性画分には主として長鎖結合型-Cが分画されたが, 炭素数8～12の脂肪酸の結合型は, 少量ながら両画分に移行し, その境界は炭素数で明瞭に区分されるものではなかった。 3) 過塩素酸分画でえられた結合型-Cの加水分解は, 比較的高濃度のアルカリ処理によるのが適当であった。また3.5N KOH中でも, 遊離-Cの損失はみられなかった。 4) 牛乳のCは分画操作, アルカリ処理操作によって希釈され, 放射能測定用の検液50μ1中には1nmol以下となった。微量のCを測定するために, 反応液に含まれるacetyl-CoAの放射能を0.05μCi/5nmolにする必要があった。 5) 反応液にトリス緩衝液を用いると, Cacetyl-transferaseの添加後の時間経過に伴って, 放射能測定値が高くなり, 測定精度が低下するが, リン酸緩衝液ではこの現象を認めなかった。 6) 以上の結果から, Cの分画定量法を設定したが, 測定限界は放射能測定用の検液50μl中のC量として0. 05nmolで, 回収試験, 繰返し精度でも, ほぼ満足すべき結果がえられた。